高效液相色谱柱用于快速分离混合极性样品，与C8或C18柱相比，疏水性较小，通常可使用水相成分高的洗脱液。对非极性化合物表现了更短的保留时间，对极性化合物几乎没有明显影响。高效液相色谱柱是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱。
性能优点：
1、分离生物分子的理想选择*封端；
2、高覆盖率，*键合，球型硅胶载体，*封端中等的疏水性；
3、固定相的疏水性较小；分离特性不同于ODS。
实验条件：
1、色谱柱1长15cm，内径4.6mm，装填10um的C-18烷基键合固定相；
2、色谱柱2长15cm，内径4.6mm，装填5um的C-18烷基键合固定相；
3、流动相甲醇：水(85:15)， 流量0.8ml/min；
4、紫外光度检测器波长 254nm，灵敏度0.08；
5、进样量5μ1。
高效液相色谱柱的实验步骤：
1、根据实验条件和实验录像指导，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样；
2、吸取5μ1苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文件名；
3、用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据；
4、在仪器上测定色谱柱2的塔板数，打印色谱图并比较色谱柱柱效差异。
数据记录及处理：
1、记录实验条件。
a、色谱柱与固定相；
b、流动相及其流量、柱前压；
c、检测器及其灵敏度；
d、进样量；
2、记录色谱峰的保留时间tR和相应色谱峰的半峰宽Y12。
3、分别计算苯、萘、联苯在该色谱柱上的理论塔板数n和理论塔板高度。
