一、添加剂的添加

1.温度的掌握：卵黄和抗生素类添加的温度都不应太高。

2.定量：过多会抑制一些目标菌，太少又导致杂菌的过度生长。

二、培养温度的掌握 生化培养箱

1.真菌类：25-28℃培养

2.细菌类：李氏菌在增菌和生化中要求培养温度在30℃左右。

3.其他一般在36℃左右

三、接种方法

常用的方法主要有划线、三点接种、穿刺接种、倾注接种、涂布接种、液体接种。

四、革兰氏染色方法

染色时间的掌握、冲洗的方法。

五、划线获得单个菌落的方法划不出单个菌落的原因

1.平板上有过多的水分；

2.划线时接种环未经反复灼烧。

3.多区划线，三区或四区划线。

六、涂布和倾注的区别

1.涂布利于观察，但由于涂布棒上会带有少量的菌液，影响计数的准确性。

2.涂布更为准确，但不利于观察菌落的状态。

七、培养基配制时应注意的问题

1.灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的培养基温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量。

2.琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。

3.培养基不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏。

4.含琼脂的培养基灭菌后，要摇匀。

八、板的保存

大多数平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。

九、观察时间的掌握

按SN、GB等标准或培养基的使用说明所述时间进行观察，时间过短或时间过长，单菌落的特征都不会很明显。如单增李斯特氏菌显色培养基，时间短单菌落看不到环，时间长绵羊李氏菌也会产生沉淀环。OXA、PALCAM的观察也如此，时间过长，李氏菌使整个平板成黑色，不利于观察单个菌落。

十、生化实验

1.接种的方法；

2.氧化型和发酵型实验操作；

3.阳性菌种的对照；

4.接种前的纯化。挑取单个菌落进行一系列的生化。

十一、关于杀菌的几个概念

1.抑制：是在亚抑制剂量因子作用下导致微生物生长停止，但在移去这些因子后生长仍可以恢复的生物学现象。

2.死亡：在致死剂量因子的作用下或在亚致死剂量因子长时间的作用下，导致微生物生长能力不可逆丧失，即使移去这种因子后生长仍不能恢复的生物学现象。

3.防腐：在某些化学物质或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生长的一种措施，它能防止食物腐烂或防止食物霉变。

4.消毒：利用某种方法杀死或灭活物质或物体中病原微生物的一种措施，它可以起到防止感染和传播的作用。

5.灭菌：利用某种方法杀死物体中包括芽孢在内的病原微生物的一种措施。

6.：利用具有选择毒性的化学物质，例磺胺、抗生素等对生物体内部被微生物感染的组织或病变细胞进行治疗，以杀死组织内的病原微生物或病变细胞，但对有机体无毒害作用的治疗措施。

十二、产品的保存

1.干粉培养基：避光干燥，结块后不能使用。

2.亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等：冷冻保存，使用时，要常温解冻，避免水浴加热。

3.抗生素类：冷藏保存，温度过高会导致灵敏度的下降。

4.兔血浆：冷藏保存少量的红色不会影响结果。