2023年01月03日 19:40:32 来源:上海双旭电子有限公司 >> 进入该公司展台 阅读量:16
毛细管电泳分析对进样技术有哪些要求?
电泳仪:为电泳提供外部电场而设计的直流电源。输出电压或电流或功率要求相对稳定或按特定规则变化。常用的电泳分析方法主要有:醋酸纤维素膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、二维电泳、毛细管电泳。其中,毛细管电泳分析对采样技术的要求非常高,采样操作如下:
1、注射区越小越好:
无论采用何种进样方式,毛细管插入样品溶液的深度一般都小于毛细管总长度的1%~2%,以尽量减少样品溶液通过毛细管吸附进入毛细管影响性能的注射量。样品管中的溶液至少为5μL,进样量为1-50nL。
2、注射时间尽量短:
通常注射时间为0.5~1s。此时,附着在毛细管上的样品量相对于吸入量可以忽略不计。
虽然毛细管电泳的进样时间可以达到±0.1s,但毛细管插入样品管时不可避免地会有一些溶液粘附。过短的进样时间会影响分析的重复性。
3. 样品预浓缩:
受毛细管总体积的限制,毛细管电泳不能像HPLC那样增加进样量来提高检测灵敏度,但可以采取一些措施来提高它的浓度。
*当样品缓冲液的电导率明显低于电泳缓冲液的电导率(100倍以上)时,在毛细管两端施加电压使分子在样品区前后形成较大的电场在样品溶液中迁移速度更快。当这些分子到达电泳缓冲液的边界时,由于电场减弱,迁移速度减慢,使样品区变窄,增加浓度,达到浓缩的目的。
* 当样品缓冲液和电极缓冲液的电导率相同,且样品浓度较稀,不适合进一步稀释时,可以在进样前吸入一些水,以达到浓缩的目的。
无论采用何种进样方法,上述方法都可以使样品积累和浓缩。但是,由于聚集区电位的急剧下降,该区的温度会升高。
4、毛细管插入样品溶液后,应立即开始取样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则,会发生毛细管作用和虹吸作用,导致误差和谱带变宽。
5、电极不要与毛细管接触,样品池和缓冲池液面高度要平衡。
6. 保持系统尽可能恒定。因为温度直接影响粘度,它影响恒定的注射量。
7、样品溶液中的溶剂必须与缓冲液混溶,前者的离子强度应低于后者。
8. 防止样品溶液和缓冲液的蒸发和损失。